蛋白質(zhì)純化的一般注意事項(xiàng)

在進(jìn)行任何一種蛋白質(zhì)純化得時(shí)候，都要時(shí)刻注意維護(hù)它的穩(wěn)定，保護(hù)它的活性，有一些通用的注意事項(xiàng)需要牢記，它們包括：

1、操作盡可能置于冰上或者在冷庫(kù)內(nèi)進(jìn)行。

2、不要太稀，蛋白濃度維持在μg/mL～mg/mL。

3、合適的pH，除非是進(jìn)行聚焦層析，所使用的緩沖溶液pH避免與pI相同，防止蛋白質(zhì)的沉淀。

4、使用蛋白酶抑制劑，防止蛋白酶對(duì)目標(biāo)蛋白的降解；在純化細(xì)胞中的蛋白質(zhì)時(shí)，加入DNA酶，降解DNA，防止DNA對(duì)蛋白的污染。

5、避免樣品反復(fù)凍融和劇烈攪動(dòng)，以防蛋白質(zhì)的變性。

6、緩沖溶液成分盡量模擬細(xì)胞內(nèi)環(huán)境。

7、在緩沖溶液中加入0.1~1mmol/L DTT(或β-巰基乙醇），防止蛋白質(zhì)的氧化。

8、加1~10mmol/L EDTA金屬螯合劑，防止重金屬對(duì)目標(biāo)蛋白的破壞。

9、使用滅菌溶液，防止微生物生長(zhǎng)。